大家好，师哥今天给大家带来的这篇文章，分值不是最高，但是非常吸睛，自带光环，毕竟探讨的可是堪称“神药”的小檗碱（BBR）。小檗碱被证明具有多种药理作用，包括抗菌、抗炎、降血糖、降血脂、抗动脉硬化、抗AD和抗氧化等，临床应用价值广，研究意义大。
那么其作用靶点有哪些了？北京协和医学院汪燕翔团队利用基于活性的蛋白质组分析（ABPP）技术（该技术被广泛用于靶点鉴定和药物发现，大家千万必要错过，可以查看“基于活性的蛋白质组学在靶点鉴定和药物发现中的应用”初步了解下），挖掘出BBR的主要抗炎靶点EIF2AK2，并进行了体内外的验证及机制探讨，研究逐步深入，各种研究方法信手拈来，又恰当到位，精彩纷呈，师哥看的是练练称赞，感觉已经超出这个分段的水平。那就快跟师哥一起来看下吧！（药物的靶点鉴定，一直是研究重点和难点，从分析的角度，可以利用网络药理学/分子对接等技术，那从实验角度如何探讨，本文是一个非常好的模板，大家不要错过了。有目标，没思路？有想法，难落地？快找师哥寻求帮助吧！）
l题目：筛选并鉴定小檗碱抗炎的关键靶标EIF2AK2
小檗碱被证明具有多种药理作用，特别是抗菌、抗炎方面等，但是对其具体的靶点基因鉴定仍需进一步的探讨。本文作者计划利用ABPP技术，筛选并鉴定BBR的关键抗炎基因。
1，通过细胞学实验，筛选出最有效的BBR光亲和探针，用于后续靶点筛选；
2，利用上述探针，通过ABPP技术，挖掘BBR的潜在靶点基因，并进行验证；
3，通过分子对接和单点突变技术，确认BBR与靶点基因EIF2AK2的结合域；
4，体内/体外实验探究EIF2AK2抗炎的具体途径；
作者团队构建了10种BBR光亲和探针，在THP-1细胞构建的炎症模型中，通过IL-1β的水平进行探针筛选，发现探针7a和11b表现出显著的炎症抑制作用（图1A-C）；作者进一步利用上述探针，进行ABPP测定，发现BBR可以竞争性抑制7a和11b的结合靶点（图1D-E）；筛选出探针11b作为后续研究的探针（图1F-G）。
用11b探针与THP-1细胞处理，将标记的蛋白质组与Cy3连接后，通过SDS-PAGE电泳分离、LC-MS/MS分析，获得44个BBR的潜在靶标（图2B-C），并通过WB实验进行4个靶标的验证（图2D）。通过CETSA实验，检测确认BBR与四种靶标的配对(图3A)。通过重组蛋白SPR分析以及分子对接分析，再次确认BBR与靶标之间的作用(图3B-G)。
免疫共沉淀（IP）确认BBR可降低EIF2AK2的二聚化及底物磷酸化（图4A,B）
对于EIF2AK2的分子作用，作者通过比较发现，BBR可以抑制NLRP3的表达，而C16虽然可以抑制EIF2AK2，却对NLRP3无影响，由此表明，BBR的靶点是EIF2AK2（图5D-E)。同样的结论也出现在对脑组织的检测，BBR可调节EIF2AK2来抑制脑炎症（图5F-G）。
作者对EIF2AK2敲除鼠施加BBR后，发现BBR降低炎症因子的表型被减弱（图6A-F）；而肝脏的病理染色也发现，基因敲除鼠对BBR的降低肝脏炎症变得不够明显（图6G）。
本文可以称得上是一篇中药单体的模板文章，从靶点基因筛选到功能验证，从生信分析到实验验证，从体外到体内，衔接完整。特别是在靶点筛选时，使用基于活性的蛋白质组分析（ABPP）技术，可谓创新性/可行性双保险。推荐做药物的，包括中药研究的小伙伴快来抄作业。不论是网药入手，还是测序及实验入手，中医药研究大有可以，小伙伴们如需技术协助，可以扫码联系师哥哦！
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原文始发于微信公众号（云生信学生物信息学）：IF14.5！中医“神药”小檗碱的抗炎靶标确定：北京协和医学院汪燕翔团队，ABPP技术妙用，一招接一招的精彩！
